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一、儀器的工作原理
分光光度計的基本原理是溶液中的物質(zhì)在光的照射激發(fā)下，產(chǎn)生了對光的吸收效應(yīng)，物質(zhì)對光的吸收是具有選擇性的。各種不同的物質(zhì)都具有其各自的吸收光譜，因此當(dāng)某單色光通過溶液時，其能量就會被吸收而減弱，光能量減弱的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系，也即符合于比色原理—一比耳定律。
τ=I/Io
log I/Io=KCL
A= KCL
從以上公式可以看出，當(dāng)入射光、吸收系數(shù)和溶液的光徑長度不變時．透過的光是根據(jù)溶液的濃度而變化的，752紫外可見分光光度計的基本原理是根據(jù)上述物理光學(xué)現(xiàn)象而設(shè)計的。
二、752紫外可見分光光度計儀器的安裝、使用、安裝
1 儀器在安裝使用前應(yīng)對儀器的安全性進(jìn)行檢查，電源電壓是否正常，接地線是否牢固可靠，在得到確認(rèn)后方和接通電源使用。
2 儀器經(jīng)過運(yùn)輸和搬運(yùn)等原因，會影響波長準(zhǔn)確度，應(yīng)進(jìn)行儀器調(diào)校后使用。
使用：儀器使用前需開機(jī)預(yù)熱30min。
本儀器鍵盤共有4個鍵，分別為； 1 A /τ/C/F
1SD
2 ▽／0％
3?／100％
4 A /τ/C/F鍵：每按此鍵來切換A、τ 、C、F之間的值。
A——吸光度（Absorbance）
T——透射比（Trans）
C——濃度（conc）
F——斜率（Factor）
（2）F值通過按鍵輸入（后面介紹如何設(shè)置）
5SD鍵：該鍵具有2個功能
a）用于RS232串行口和計算機(jī)傳輸數(shù)據(jù)（單向傳輸數(shù)據(jù)，儀器發(fā)向計算機(jī)）。
b）當(dāng)處于F狀態(tài)時，具有確認(rèn)的功能，即確認(rèn)當(dāng)前的F值，并自動轉(zhuǎn)到C，計算當(dāng)前的C值（C=F*A）。
6 ▽／0％鍵：該鍵具有2個功能
a）調(diào)零；只有在τ狀態(tài)時有效，打開樣品室蓋，按鍵后應(yīng)顯示0.000。
b）下降鍵：只有在F狀態(tài)時有效，按本鍵F值會自動減1，如果按住本鍵不放，目動減1會加快速度；如果F值為0后，再按鍵它會自動變?yōu)?/font>1999。而按鍵開始自動減1。
7 ?／100％鍵；該鍵具有2個功能
a）只有在A、τ狀態(tài)時有效，關(guān)閉樣品室蓋，按鍵后應(yīng)顯示0.000、100.0。
b）上升鍵：只有在F狀態(tài)時有效，按本鍵F值會自動加1，如果按住本鍵不放，自動加1會加快速度，如果F值為1999后，再按鍵它會自動變?yōu)?/font>0，再往鍵開始自動加l。
例如：設(shè)置斜率為1500。
方法一
T）按 A／τ／C／F鍵切換到 F狀態(tài)。
b）如果當(dāng)前F值為1000，則按?／100%鍵，直到F值為1500。
C）再按 SD鍵，表示當(dāng)前的 F值為 1500，然后自動回到 C狀態(tài)，假如所測的 A值為 0．234，則此時顯示 C值為 0351。
方法二
a）按A／τ／C／F鍵切換到F狀態(tài)。
b）如果當(dāng)前的 F值為 1000，則按?／100%鍵，直到F值為 1500、再按 A／τ／C／F鍵切換到C狀態(tài)，假如所測的A值為0.224，則此時顯示C值為0351。
722型分光光度計
一、 722型分光光度計測量原理
分光光度法測量的理論依據(jù)是伯郎—比耳定律：當(dāng)容液中的物質(zhì)在光的照射和激發(fā)下，產(chǎn)生了對光吸收的效應(yīng)。但物質(zhì)對光的吸收是有選擇性的，各種不同的物質(zhì)都有其各自的吸收光譜。所以根據(jù)定律當(dāng)一束單色光通過一定濃度范圍的稀有色溶液時，溶液對光的吸收程度A與溶液的濃度c（g/l）或液層厚度b（cm）成正比。其定律表達(dá)式A=abc
（a是比例系數(shù)）。當(dāng)c的單位為mol/l時，比例系數(shù)用ε表示，則A=εbc稱為摩爾吸光系數(shù)。其單位為L•mol-1•cm-1它是有色物質(zhì)在一定波長下的特征常數(shù)。
T（透光率）=I/I0 A（吸光度）= -lgT 或 A=K•C•L（比色皿的厚度）
測定時，入射光I,
吸光系數(shù)和溶液的光徑長度不變時，透過光是根據(jù)溶液的濃度而變化的，即“K”為常數(shù)。比色皿厚度一定，“L”、“I0”也一定。只要測出A即可算出“C”。
二、 722型分光光度計 的使用
1、將靈敏度旋鈕調(diào)至“1”檔（信號放大倍率小）。
2、開啟電源，指示燈亮 ，選擇開關(guān)置于“T”，波長調(diào)至到測試用波長。儀器預(yù)熱20分鐘。
3、打開試樣室（光門自動關(guān)閉），調(diào)節(jié)透光率零點(diǎn)旋鈕，使數(shù)字顯示為000.0。（調(diào)節(jié)100%T旋鈕），蓋上試樣室蓋，將比色皿
架處于蒸餾水校正位置，使光電管受光，調(diào)節(jié)透光率100%旋鈕使數(shù)字顯示100.0。如顯示不到100.0，則可適當(dāng)增加微電流放大的倍數(shù)。（增加靈敏度
的檔數(shù)同時應(yīng)重復(fù)（3）調(diào)節(jié)儀器透光率的“0”位）但盡量使倍率置于低檔使用。這樣儀器會有更高的穩(wěn)定性。
4、預(yù)熱后，按（3）連續(xù)幾次調(diào)整透光率的“0”位和“100%”的位置，待穩(wěn)定后儀器可進(jìn)行測定工作。
三、 722型分光光度計吸光度“A”的測量
將選擇開關(guān)置于A 。調(diào)節(jié)吸光度調(diào)零旋鈕，使得數(shù)字顯示為零，然后將被測樣品移入光路，顯示值即為被測樣品的吸光度值。
四、 濃度c的測量
將選擇開關(guān)由“A”旋至“C”將已標(biāo)定濃度的樣品放入光路，調(diào)節(jié)濃度旋鈕，使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值，將被測樣品放入光路即可讀出被測樣品的濃度值。
722型分光光度計 注意事項(xiàng)：
1、測量完畢，速將暗盒蓋打開，關(guān)閉電源開關(guān)，將靈敏度旋鈕調(diào)至低檔，取出比色皿，將裝有硅膠的干燥劑袋放入暗盒內(nèi)，關(guān)上蓋子，將比色皿中的溶液倒入燒杯中，用蒸餾水洗凈后放回比色皿盒內(nèi)。
2、每臺儀器所配套的比色皿不可與其它儀器上的表面皿單個調(diào)換。
722型分光光度計 使用方法
（1）預(yù)熱儀器 將選擇開關(guān)置于“T”，打開電源開關(guān)，使儀器預(yù)熱20分鐘。為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照，預(yù)熱儀器時和不測定時應(yīng)將試樣室蓋打開，使光路切斷。
（2）選定波長 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，轉(zhuǎn)動波長手輪，調(diào)至所需要的單色波長。
（3）固定靈敏度檔 在能使空白溶液很好地調(diào)到“100%”的情況下，盡可能采用靈敏度較低的擋，使用時，首先調(diào)到“1”擋，靈敏度不夠時再逐漸升高。但換擋改變靈敏度后，須重新校正“0%”和“100%”。選好的靈敏度，實(shí)驗(yàn)過程中不要再變動。
（4）調(diào)節(jié)T=0% 輕輕旋動“0%”旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”，（此時試樣室是打開的）。
（5）調(diào)節(jié)T=100% 將盛蒸餾水（或空白溶液，或純?nèi)軇┑谋壬蠓湃氡壬笞苤械?格內(nèi)，并對準(zhǔn)光路，把試樣室蓋子輕輕蓋上，調(diào)節(jié)透過率“100%”旋鈕，使數(shù)字顯示正好為“100.0”。
（6）吸光度的測定 將選擇開關(guān)置于“A”，蓋上試樣室蓋子，將空白液置于光路中，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)節(jié)旋鈕，使數(shù)字顯示為“.000”。將盛有待測溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格內(nèi)，蓋上試樣室蓋，輕輕拉動試樣架拉手，使待測溶液進(jìn)入光路，此時數(shù)字顯示值即為該待測溶液的吸光度值。讀數(shù)后，打開試樣室蓋，切斷光路。
重復(fù)上述測定操作1-2次，讀取相應(yīng)的吸光度值，取平均值。
（7）濃度的測定 選擇開關(guān)由“A”旋置“C”，將已標(biāo)定濃度的樣品放入光路，調(diào)節(jié)濃度旋鈕，使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值，將被測樣品放入光路，此時數(shù)字顯示值即為該待測溶液的濃度值。
（8）關(guān)機(jī) 實(shí)驗(yàn)完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架用軟紙擦凈。
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